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Ni-TED 6FF预装色谱柱图片
产品货号:
GS4788
中文名称:
Ni-TED 6FF预装色谱柱
英文名称:
Ni-TED 6FF Prepacked chromatographic column
产品规格:
1mL|5mL(1.6×2.5cm)|5mL(0.8×10cm)|20mL|40mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

Ni-TED是一种将螯合了镍离子的TED配基键结合在琼脂糖微球上的亲和层析分离介质。由于TED对镍离子超强的螯合能力,使亲和Ni-TED能够耐受高浓度的螯合剂EDTA和还原剂DTT,适用于含有EDTA或DTT等成分的带His-Tag的重组蛋白,以及能够与Ni2+相互作用的生物分子的分离纯化。本预装柱适配各类中压色谱系统,如ÅKTA等)




规格1mL5mL(1.6×2.5cm)5mL(0.8×10cm)20mL40mL
柱子尺寸
(内径×高度)
0.7×2.5cm1.6×2.5cm0.8×10cm1.6×10cm1.6×20cm
基质 6%高度交联琼脂糖凝胶
平均粒径90μm
配基密度80~140μmol-TED-Ni2+/mL
结合能力约15mg组氨酸标签蛋白/mL树脂
耐压0.3MPa
运行流速≤600cm/h
pH稳定性2~12 (工作);2~14 (CIP)
化学稳定性20分钟内耐受30%异丙醇;
2小时内耐受500mM咪唑,100mM EDTA;
24小时内耐受10mM EDTA,5mM DTT,5mM TCEP,20mM β-巯基乙醇,1M NaOH,6M盐酸胍;
1周内耐受0.01M HCl,0.01M NaOH
储存缓冲液 20%乙醇
储存温度 4~8℃,不可冷冻



  • 可选购我司的结合/清洗缓冲液(适用于Ni-TED)洗脱缓冲液(适用Ni-TED)
    • 客户可根据样品情况自行决定清洗缓冲液中的咪唑浓度,推荐清洗缓冲液中咪唑终浓度10~20mM。
  • 用户也可按照以下配方配制缓冲液:
    • 结合缓冲液:20mM PB,0.5M NaCl,调pH至7.4,0.22μm或0.45μm过滤除菌;
    • 清洗缓冲液:20mM PB,0.5M NaCl,1~30mM咪唑,调pH至7.4,0.22μm或0.45μm过滤除菌;
    • 洗脱缓冲液:20mM PB,0.5M NaCl,500mM咪唑,调pH至7.4,0.22μm或0.45μm过滤除菌。
    • 配制缓冲液所需要的水和化学试剂必须是高纯度的,并且使用前要过0.45μm的微孔滤膜除菌。
    • 不建议样品和结合缓冲液中添加咪唑,洗脱缓冲液中的咪唑最优浓度取决于蛋白样品,通常可以选择10~20mM的咪唑浓度。
    • 缓冲液中NaCl是为了抑制树脂的离子交换作用。
    • 一般情况下,洗脱缓冲液中的咪唑浓度可洗脱下大多数的目的蛋白,也可适当提高咪唑浓度,增加孵育时间,使洗脱效果更好。
    • 如果是包涵体纯化,在平衡液、洗杂液、洗脱液中添加8M尿素或6M盐酸胍,效果会更好。



以下步骤以1mL柱装树脂为例。
  • 样品的准备:将宿主细胞碎片通过离心等方式去除,然后过0.45μm的微孔滤膜,用结合缓冲液进行适当稀释。为了获得最大的载量,不要在蛋白样品溶液中添加咪唑。
  • 水洗:用5~10倍柱体积纯水以50~150cm/h清洗树脂,去除乙醇。
  • 平衡:用5~10倍柱体积结合缓冲液以150~600cm/h平衡介质,保证介质中的溶液的组分和pH与样本一致。
  • 上样:样品经过离心、过滤(0.45μm)后以低流速进行上样,建议流速150cm/h。
    • 蛋白的结合能力随着裂解物类型、目标蛋白性质、流速、pH变化而变化,流速越低,结合效果越好。纯化时温度比较低时可以减小流速,防止样品和缓冲液黏度变大导致柱压太高。
  • 洗杂:用10~20倍柱体积洗涤缓冲液以150cm/h洗杂,清洗非特异吸附的杂蛋白,并收集洗杂液用于后续分析。
  • 洗脱:用5~10倍柱体积洗脱液以低流速进行洗脱,并收集洗脱液。
    • 对于洗脱,除了选用咪唑,还有其他方式,例如降低pH值(2.5~5.0)。本制品每次使用后不需要用镍离子再生,但是使用低pH时需要用镍离子再生。
  • 水洗:用5~10倍柱体积纯化水以0.5mL/min清洗树脂介质,去除介质中洗脱液。
  • 保存:用5~10倍柱体积20%乙醇以0.5mL/min清洗清洗介质,在4~8℃保存。
    • 4~8℃保存在20%乙醇中可以防止微生物的生长。
  • 再生:用2倍柱体积1mol/l NaOH清洗树脂介质,接着用10~20倍柱体积去离子水冲洗。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。


在位清洗
介质经过长期使用后,过多的污染物会使柱床反压增大,从而降低柱效与介质吸附载量,甚至损害介质的寿命。定期CIP可有效保护介质。根据料液的不同,一般每使用5次后进行一次CIP,如果料液变性,有沉淀物析出,则需使用后立刻进行CIP。可按下述方法对介质进行CIP:
  • 常规清洗:用0.5~1M NaOH以100cm/h的流速冲洗2~5倍柱体积;
  • 去除强结合物质:用30%异丙醇以100cm/h流速冲洗2~5倍柱体积,或者用含有0.1M乙酸的0.1~0.5%非离子洗涤剂以60cm/h流速冲洗5~10倍柱体积,并用5~10倍柱体积的70%乙醇洗涤去除残留的洗涤剂。



问题可能原因解决方案
纯化时目标物不与介质结合或结合量较低上样速度过快降低上样流速
蛋白或脂类在介质中聚集影响结合新的介质及时有效地清洗介质或更换
表达条件过于剧烈,His标签被包裹,不能与介质结合建议做一个空载体作为表达和纯化的对照,确定表达条件是否合适
初始样品中没有组氨酸标签蛋白通过基因序列或His标签抗体核实
目标蛋白出现在流穿液中目标蛋白没有成功表达或样品和平衡液中pH和组分不正确
洗脱时没有收集到目标物或只收集到少量目标物洗脱条件不合适加大洗脱液中咪唑浓度
洗脱时间不够降低流速,延长洗脱液和Ni柱的孵育时间
洗脱体积过小加大洗脱体积
目标物在洗脱液条件下出现聚集沉淀检测目标物在洗脱液条件(pH和盐浓度)下的溶解度和稳定性。可以尝试在洗脱液中加入一些添加剂:如0.2%Triton X-100或0.5% Tween 20
样品没有经过前处理样品上柱前必须要经过离心或过滤
洗脱出的组氨酸标签蛋白不纯在样品和binding buffer混合液中,咪唑浓度过低在样品和binding buffer混合液中用更高浓度的咪唑浓度。浓度20~40mM是推荐浓度,但是更高的浓度可能也是可以的。
洗涤不够重复洗涤步骤以获得最佳纯度。
标签蛋白可能降解加入蛋白酶抑制剂(注意EDTA浓度)并在4℃进行操作
杂质与介质出现非特异性吸附适当选择添加剂降低非特异性吸附,如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油。

相关搜索:Ni-TED 6FF预装色谱柱His标签蛋白纯化柱His-Tag蛋白纯化柱镍柱Ni-TED柱Ni-TED 6FF Prepacked chromatographic column
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